Способ определения концентрации препаратов бензилпенициллина в процессе специфической терапии больных сифилисом

Н. К. Левчик, М. В. Пономарева

Уральский НИИ дерматовенерологии и иммунопатологии, г. Екатеринбург

В случае антибактериальной терапии непосредственное наблюдение за терапевтическим эффектом сопряжено со значительными трудностями, поэ­тому определение концентрации препарата в крови является тем инструмен­том, который позволит провести своевременную коррекцию режима или спо­соба введения в случае наличия индивидуальных особенностей фармакокине­тики. Это особенно актуально в случае сифилитической инфекции, когда за­ключение о результативности проведенной терапии становится возможным лишь по истечении длительного срока.

Микробиологические методы определения концентрации антибиотиков, несмотря на свою доступность, не нашли широкого применения, что в значи­тельной степени связано с трудоемкостью их выполнения в классическом ва­рианте (Навашин С. М., Фомина И. П., 1982).

Целью настоящего исследования являлось усовершенствование микро­биологического метода определения концентрации антибиотиков, позволяю­щее существенно сократить трудовые и материальные затраты при сохране­нии необходимой точности метода.

Наибольшим изменениям подверглась технология заливки агара. Подготавливают необходимое количество расплавленного и охлажденного до 50 ºС 1,5 % агара, в который вносятся тест-микробы; выбор тест-микроба определяется применяемым антибиотиком. Заливку агара производят с ис­пользованием системы из двух стеклянных пластин, скрепленных зажи­мами, между которыми установлена П-образная рамка толщиной 1–2 мм. Ориентировочный размер пластин 9 х 12 см. После застывания агара снима­ют зажимы, верхнюю пластину и рамку.

В слое агара на нижней пластине пробойником вырезают ряды лунок ди­аметром 2 мм. В лунки одного из рядов вносят стандартные растворы анти­биотика, в лунки других рядов – испытуемые биологические жидкости (либо цельные, либо в разведении 1 : 1).

Снижение толщины агара до 1–2 мм позволяет снизить количество ис­пользуемого материала и способствует адекватной визуализации зон задерж­ки роста тест-культуры (за счет повышения контрастности). Формирование на ровной поверхности стекла равномерного слоя агара обеспечивает соблю­дение условия строгой стандартизации процесса диффузии из всех лунок, что существенно повышает точность метода и отменяет необходимость много­кратного испытания проб.

Уменьшение диаметра вырезаемых в застывшем агаре лунок до 2 мм обе­спечивает сокращение площадей зон задержки роста тест-культуры и позво­ляет разместить калибровочные и испытуемые пробы на одном и том же слое агара, что упраздняет использование контрольных образцов.

Затем пластину помещают во влажную камеру и инкубируют при темпе­ратуре 37 °С в течение 16–18 ч. Через указанное время измеряют зоны задерж­ки роста тест-культуры стандартными и испытуемыми пробами. По значени­ям стандартных образцов на полулогарифмической бумаге строят калибро­вочную кривую, выражающую зависимость между дозой и диаметром зон за­держки роста, и по ней определяют концентрации испытуемых проб.

При исследовании уровней антибактериальной активности, создаваемой в крови больных сифилисом в процессе специфической терапии препаратами бензилпенициллина, оптимальным является использование следующей схемы.

Для изучения концентрации антибиотика в первые часы после введения используют штамм Staphylococcus aureus АТСС 25923 и растворы стандарта бензилпенициллина в концентрациях 0,5; 1,5; 3; 4; 5; 6 мкг/мл.

При исследовании остаточного уровня (перед введением следующей дозы) применяют тест-культуру Micrococcus luteus АТСС 9341 (Беднова В. Н., Наволоцкая Т. И., Милонова Т. И. и др., 1998) и растворы стандарта бензилпе­нициллина в концентрациях 0,015; 0,03; 0,06; 0,125; 0,25; 0,5 мкг/мл.

Использование данной методологии существенно облегчает проведение лабораторных исследований и обеспечивает возможность накопления данных об индивидуальных и групповых особенностях фармакокинетики у пациен­тов с сифилитической инфекцией, приводящих к неудачам терапии.