Диагностическое значение использования метода ПЦР для оценки микробного биоценоза половых путей у женщин

Н. П. Евстигнеева, О. А. Воронова, Н. М. Герасимова

Уральский НИИ дерматовенерологии и иммунопатологии, г. Екатеринбург

В результате глубокого изучения этиологической структуры бактерий, обусловливающих различные нарушения микробиоценоза урогенитального тракта, спектр условно-патогенных микроорганизмов постоянно расширяет­ся. Многие микроорганизмы до конца не изучены, но бесспорной является полимикробная этиология урогенитальных дисбиозов. Бактериологический способ диагностики нарушений микробиоты влагалища и цервикального ка­нала до сих пор является «золотым стандартом», при котором определяются видовой состав, титр преобладающих микроорганизмов, чувствительность к антибиотикам, но ряд значимых возбудителей трудно поддается культивиро­ванию (анаэробы, внутриклеточные микроорганизмы и др.).

К некультивируемым микроорганизмам относятся облигатно-анаэробные грамположительные бактерии Atopobium vaginae – маркер бактериального вагино­за с рецидивирующим течением, не имеющие специфических микроскопических признаков, устойчивые к метронидазолу, традиционному лечению бактериального вагиноза. Бактериоскопический метод, достаточно успешно используемый для ди­агностики, оказался малопригоден для детекции бактерий с выраженным полимор­физмом (от мелких грампозитивных кокков до палочек) (Schwiertz A. et al., 2006).

В связи с этим должны быть разработаны и внедрены в практику ин­новационные подходы в диагностике инфекций, обусловленных условно­патогенными микроорганизмами. Методом ПЦР в режиме реального времени возможно определение всех потенциально значимых микроорганизмов, вклю­чая анаэробы и внутриклеточные патогены.

Цель исследования – провести сравнительное исследование видовой структуры урогенитальной микробиоты, полученной микробиологически и методом ПЦР в режиме реального времени.

Проведено комплексное клинико-лабораторное обследование 53 женщин. Средний возраст пациенток составил 28,7±5,6 года. Клинический материал (отделяемое влагалища) направлялся в клиническую лабораторию, лаборато­рию клинической микробиологии, ПЦР-диагностики (использовался набор реагентов «Фемофлор-16»).

Из анамнеза удалось выяснить, что 46,15 % женщин страдают заболева­нием год и более, 30,77 % – от 2 месяцев до года. С острыми явлениями обра­тились только 15,38 % больных. Трети обратившихся женщин (30,77 %) был выставлен диагноз аэробного вагинита (АВ), а остальным (76,92 %) – бакте­риального вагиноза (БВ) (р = 0,025). Данные клинического осмотра подтвер­дили гиперемию вульвы лишь у 15,09 % пациенток (р ≤ 0,025), у 64,15 % были отмечены признаки воспаления шейки матки, у 22,64 % выявлены признаки воспаления во влагалище. Таким образом, по данным клинического осмотра, 45 больным был выставлен диагноз бактериальный вагиноз (84,91 %) и лишь 8 больным – вагинит (15, 09 %). У женщин с вагинитом при бактериологичес­ком обследовании были выявлены только лактобактерии – 75,0 %, коринебак­терии – 25,0 %, стрептококки – 25,0 %, энтеробактерии – 25,0 %. У пациен­ток с вагинозом преобладали гарднерелла – 55,6 %, коринебактерии – 33,3 %, микоплазмы – 22,2 %, уреаплазмы – 11,2 %, в низких титрах присутствовали лактобактерии. Анализ результатов оценки качественного и количественно­го состава микробиоценоза влагалища, полученных с применением Real-Time PCR, показал, что в группе женщин с вагинитом лактобактерии обнаружены у 50,0 %, эубактерии – у 25,0 %, клостридии – у 50,0 %, уреаплазмы – у 25,0 % пациенток. Среди пациенток с вагинозом микробный пейзаж был более раз­нообразен, наиболее часто были зарегистрированы гарднерелла – 66,8 %, эу­бактерии – 77,8 %, вейонелла – 66,8 %, микоплазмы и уреаплазмы – по 55,6 % соответственно. Более чем у половины пациенток с вагинозом (55,6 %) был выявлен Atopobium vaginae. Верификация Atopobium vaginae регламентирова­на Приказом МЗ РФ № 64 от 21.02.2000.

Метод количественной Real-Time PCR диагностики микробиоты уроге­нитального тракта женщин позволяет проводить идентификацию уровня об­щей микробной обсемененности влагалища, оценить состояние нормофлоры, установить нарушение баланса условно-патогенной флоры, провести монито­ринг лечения и контроль восстановления нормальной микрофлоры.

С помощью метода генодиагностики Real-Time PCR тест-система «Фемофлор-16» были выявлены труднокультивируемые облигатно-анаэробные грамположительные бактерии (Atopobium vaginae), облигатно-анаэробные грамотрицательные бактерии Prevotella, Veilonella spp., Porphyromonas spp., Fusobacterium spp., Eubacterium spp., Sneathia, Leptotrichia, Megasphera, Dialister, Lachnobacterium. У пациенток с жалобами на выделения из влага­лища целесообразно проводить скрининговое исследование состояния уроге­нитального биоценоза методом количественной генодиагностики Real-Time PCR «Фемофлор-16».

Комплекс методов – бактериоскопия окрашенного вагинального мазка, микробиологическое исследование и генодиагностика Real-Time PCR клини­ческого материала из влагалища – является «золотым стандартом» лаборатор­ной диагностики инфекционного процесса в половых путях (до вида).