Сравнительное электронно-цитохимическое изучение диокси-фенилаланин-оксидазы в Mycobacterium leprae и Mycobacterium «lufu»

Юшин М.Ю., Маслов А.К., Анохина В.В.

ФГУ НИИ по изучению лепры Росздрава, г. Астрахань

Цель: изучение сходства между не культивирующимися in vitro Mycobacterium leprae — возбудителем лепры человека и культивирующимися на искусственных питательных средах почвенными Mycobacterium «lufu» по наличию медьсодержащего фермента диоксифенилаланин-оксидазы (ДОФА-оксидазы, тирозиназы), детекция которого используется как один из тестов идентификации Mycobacterium leprae, рекомендованный ВОЗ.

Материалы и методы: материалом для исследования служили Mycobacterium leprae в биоптатах кожи от больных лепрома-тозной лепрой и Mycobacterium «lufu», выращенные на плотной питательной среде Левенштейна-Йенсена при + 370 С в течение 10 дней. В ультратонких срезах Mycobacterium leprae и Mycobacteium «lufu» методом электронной цитохимии определяли наличие специфичного для Mycobacterium leprae фермента ДОФА-оксидазы. В качестве субстрата применяли D-3,4-диоксифенилаланин фирмы «Sigma» (США). Контроль осуществляли путем бессубстратного инкубирования исследуемого материала, ингибирования фермента добавлением в среду 10 мМ цианида натрия, а также предварительного нагревания. Результаты: сравнительное электронно-цитохимическое изучение выявило наличие ДОФА-оксидазы как в Mycobacterium leprae, так и в Mycobacterium «lufu». Маркеры активности ДОФА-оксидазы — фермент-субстратные комплексы (ФСК) — были обнаружены в следующих структурах, одинаковых для каждого вида микобактериальных клеток: мембранных компонентах (в виде усиления электронно-оптической плотности плазматической мембраны и мезосом), в цитоплазме (в виде электронно-оптически плотных гранул размером 10-50 нм) и в округлых образованиях — «гомогенных тельцах», природа которых остается неизвестной, (в виде усиления их электронно-оптической плотности). В контроле ФСК в мембранных структурах, цитоплазме и «гомогенных тельцах» как у Mycobacterium leprae, так и у Mycobacterium «lufu» отсутствовали. ДОФА-оксидазная активность у других, изученных нами микобактерий (Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium, Mycobacterium vaccae), не выявлена. Выводы: в Mycobacterium «lufu» обнаружена ДОФА-оксидаза — фермент, специфичный для Mycobacterium leprae и отсутс-твующий у других видов микобактерий. Наличие активности данного фермента является доказательством общности биологичес-ких свойств Mycobacterium leprae и Mycobacterium «lufu» и, в частности, необходимости фенольных соединений в метаболизме этих микобактерий. В наших предыдущих работах было продемонстрировано сходство морфологических и антигенных свойств Mycobacterium leprae и Mycobacterium «lufu». В данной работе получено еще одно доказательство общности биологических свойств этих микобактерий, что позволяет рекомендовать культивируемые in vitro Mycobacterium «lufu» для дальнейшего изу-ченияи использования в лепрологии.