АНТИГЕНЕМИЯ ПРИ УРОГЕНИТАЛЬНЫХ МИКОПЛАЗМЕННЫХ ИНФЕКЦИЯХ

Балабанов Д.Н.

Центральная медикосанитарная часть № 165 ФМБА России

ВВЕДЕНИЕ. Изучение биологии и роли микоплазм человека в инфекционной патологии продолжается уже несколько десятков лет. Тем не менее в настоящее время нет, по-видимому, другой такой группы микроорганизмов, споры о патогенности которых были бы столь продолжительны, а мнения столь противоречивы. Это связано с рядом причин, главными из которых является широкое распространение микоплазменных инфекций среди людей при отсутствии свойственных только этим инфекциям клинических проявлений. В последние годы у микоплазм обнаружены новые уникальные свойства. Установлено, что они обладают проапоптотической и антиапоптотической активностями, а при хронических формах инфекции в условиях in vitro могут быть причиной нестабильности генома и трансформации инфицированных клеток. Индукторами этих процессов, как показали исследования являются антигены микоплазм липопротеиновой природы.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ. Выяснить возможность существования антигенемии при урогенитальных микоплазменных инфекциях человека, определить длительность и очаги со хранения антигенов «урогенитальных микоплазм» в модельных опытах на животных.

МАТЕРИАЛ. Микоплазмы: M.hominis H34 (Mh), U.urealyticum VIII (Uu), M.genitalium (Mg) из коллекции лаборатории микоплазм НИИЭМ им. Н. Ф. Гамалеи. Животные: кролики породы шиншилла весом 2,5 кг. Пациенты: мужчины, пришедшие для обследования в Центральную медикосанитарную часть № 165 ФМБА России.

МЕТОДЫ. Культуральный метод, реакция агрегатгемагглютинации (РАГА), реакция прямой иммунофлюоресценции (РИФ), реакция пассивной гемагглютинации (РПГА), иммуноферментный анализ (ИФА), полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Проведено комплексное клиниколабораторное обследование 158 мужчин в возрасте от 18 до 52 лет, у которых были выявлены урогенитальные микоплазмы. Из них 22 пациента — с острым уретритом, 50 — с хроническим и 86 — клинически здоровые. Диагноз острого или хронического уретрита устанавливали на основании жалоб и анамнеза заболевания, а также данных объективного и лабораторных исследований.

Чаще всего у обследованных пациентов выявляли в сыворотке крови раствори мые антигены (АГ) в РАГА в 53,1 % (U.species) и 63,3 % (Mh), чем живые клетки культуральным методом 20,2 % (U.species) и 5,7 % (Mh) и ДНК с помощью ПЦР 31,6 % (U.species) и 8,9 % (Mh) в соскобах из УГТ. Живые клетки и ДНК Mh выявляли в 3 раза реже, чем U.species.

При сравнении результатов частоты выявления в крови АГ и антител (АТ) U.species и Mh одних и тех же пациентов, выявлялись АГ без АТ в 36,7 % (U.species) и 38 % (Mh) случаев, реже одновременно АГ и АТ в 16,4 % (U.species) и 25,3 % (Mh) случаев, в редких случаях только АТ 5,7 % (U.species) и 6,3 % (Mh). Таким образом, исследование «урогенитальных микоплазм» только с помощью серологических методов малоинформативно.

При остром и хроническом негонококковом уретрите (НГУ) и в ПЦР, и культуральным методом U.species выявляли значительно чаще, чем у пациентов кон трольной группы, разница оказалась несколько более выраженной при остром НГУ. Mg также выявляли у больных с острым и хроническим НГУ значительно чаще, чем у здоровых. Mh чаще обнаруживали у больных острым НГУ, но при мерно в 2 раза реже, чем U.species. Культуральным методом Mh, так же как и U.species, обнаруживали реже, чем в ПЦР. АТ к U.species выявляли только у части инфицированных, наиболее часто при хроническом НГУ. АТ к Mh класса G выявляли в сыворотке больных чаще, чем в сыворотке здоровых, класса M у больных острым НГУ почти в 2 раза чаще, чем у здоровых.

Полученные результаты свидетельствуют о причастности Uu и Mg в развитии НГУ. Данные об этиологической роли Mh неубедительны. Ее выделяли от больных в единичных случаях и редко обнаруживали в ПЦР. Кроме того, из пяти больных острым НГУ, у которых она была обнаружена, у троих наблюдалась смешанная инфекция с Uu, а у одного с Mg.

Выявление АГ Mh и U.species в крови пациентов в отсутствие живых клеток и ДНК может свидетельствовать как о длительной персистенции клеток микоплазм в небольшом количестве в каких-то не известных нам очагах и постоянным поступлением из них в кровь, так и о персистенции АГ в отсутствие живых клеток.

В первом варианте опыта исследовали длительность выявления живых клеток микоплазм и уреаплазм, внутриклеточной ДНК и АГ в динамике. Для этого в сыворотку крови человека (8 мл), не содержащую ни АГ Mh и U.species, ни АТ к ним, ни их ДНК вносили культуры всех испытуемых бактерий (по 2 мл) с известным титром и помещали в термостат при 37 0С. Через 1, 3, 5, 7, 12, 17, 30 и 40 суток культуральным методом определяли наличие живых клеток бактерий, ДНК и АГ.

Mh выявлялась на протяжении 7 суток в убывающем количестве, Uu — в тече ние 24 часов. ДНК Uu и Mh сохранялась на протяжении всего периода исследования — более 3 месяцев, антигены Mh — 12 – 13 дней, Uu — 3 – 4 дня. При внесении в сыворотку «чистой» ДНК и антигенов обнаружена та же закономерность: ДНК сохраняется на протяжении всего срока наблюдения, антигены — несколько дней. Полученные данные позволяют предположить, что ДНК, выявляемая с помощью ПЦР в биопробах, не всегда может свидетельствовать о наличии в них живых клеток. Эта реакция может выявлять ДНК погибших клеток, их фрагменты, несущие генетический материал, или фрагменты самой ДНК, способные длительно сохраняться в сыворотке крови при 37 0С in vitro. АГ микоплазм, напротив, сохраняются в сыворотке крови в условиях in vitro непродолжительное время (3 – 12 суток).

Для определения длительности сохранения живых клеток микоплазм, их АГ и ДНК в условиях in vivo была проведена серия опытов на кроликах. Предварительно все подопытные животные были проверены на отсутствие микоплазменной инфекции.

Кроликам вводили внутрибрюшинно без адъюванта по 5 мл трижды отмытой фосфатным буфером бульонной культуры Mh (титр 108 КОЕ / мл) или культуры Uu (титр 105 – 106 ЦОЕ / мл). В разные сроки после заражения у кроликов исследо вали кровь из вены. По окончании опыта животных умерщвляли и определяли на личие в пробах сыворотки и гомогенатах органов, живых клеток, АГ, ДНК. Живые клетки Mh удавалось выделять из сыворотки крови и большинства исследованных органов (кроме сердца, легкого и почки) кроликов до 2 месяцев. АГ выявляли в сы воротке крови и в большинстве исследованных органов (кроме сердца, легкого и почки) в течение 6 месяцев после заражения. ДНК Mh выявляли в сыворотке крови кроликов через 2 месяца во всех исследованных органах (кроме сердца), через 6 месяцев — в костном мозге, селезенке и тимусе. Живые клетки Uu и ДНК не выявлены в пробах сыворотки крови ни на одном из исследованных сроков, на чиная с 1й недели. В тоже время у кроликов АГ в крови и органах (кроме легкого и сердца) выявляли на протяжении всего срока наблюдения (2,5 месяца).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ. 1. Установлено, что антигены уреаплазм и M.hominis выявля ются в сыворотке крови пациентов значительно чаще, чем живые клетки и их ДНК в урогенитальном тракте. 2. Выявление антител как единственного метода для диагностики микоплазменной инфекции малоинформативно. 3. ПЦР в качестве единственного метода не может быть использована для диагностики микоплазменных инфекций, особенно после антибиотикотерапии, поскольку в организме могут длительно сохраняться ДНК или фрагменты нежизнеспособных клеток. 4. Получены данные, свидетельствующие в пользу о причастности уреаплазм и M.genitalium к развитию негонококкового уретрита. 5. Экспериментальное инфицирование лабораторных животных «урогенитальными микоплазмами человека» приводит к развитию генерализованной инфекции с длительной персистенцией возбудителя.