Вход в систему

Новое в патогенезе вульгарной пузырчатки

Новое в патогенезе вульгарной пузырчатки

 

 

Свирщевская Е.В., Таций О.А., Матушевская Е.В.*

ИБХ РАН, * ФГОУ ИПК ФМБА, г. Москва

Вульгарная пузырчатка (ВП) является тяжелым аутоиммунным дерматозом, вызванным формированием аутоантител к антигенам кератиноцитов. Основной мишенью аутоантител считаются молекулы десмосомальной адгезии десмоглеины (ДСГ) 1 и 3. Основным патогенным классом являются иммуноглобулины G4, которые обладают уникальным свойством — способностью обмениваться цепями и формировать биспецифичные анти­тела, Fab фрагменты которых распознают два различных антигена. Целью данной работы был анализ наличия второй специфичности ВП аутоантител к ДСГ3. В качестве второй мишени рассматривали два антигена — аль­фа 9 ацетилхолиновый рецептор (а9-АХР) [Nguyen V, 2000] и нормальный иммуноглобулин человека (NhIgG) [Amagai M, 1994].

Сыворотки 21 больного ВП с установленным диагнозом пулировали и выделяли из них IgG методом вы­саливания и ионообменной хроматографии. Анализ экспрессии а9-ХР проводили с помощью меченого Alexa Fluor 555 бунгаротоксина, высокоспецифичного к альфа 7, 9 и 9/10 субъединицам АХР. Экспрессию а9-ХР оце­нивали на криосрезах кожи человека, слизистой оболочки кролика и клеточных линиях кератиноцитов челове­ка HaCaT и гипофиза крысы GH4 C1, трансфектированных а7-ХР человека. Антитела из сыворотки больных, специфичные к NhIgG, выделяли на аффинной колонке с иммобилизованными IgG для внутривенного введе­ния. Связавшиеся антитела элиюровали, диализовали и анализировали их связывание с клетками кератиноци­тов человека HaCaT методом конфокальной микроскопии.

Экспрессию а9-ХР выявили только на клетках GH4 C1, но не на кератиноцитах HaCaT кожи или слизистой. Аутоантитела больных ВП интенсивно окрашивали кожу, слизистую и клетки HaCaT, слабо — клетки GH4 C1; при этом не наблюдали ко-локализации связывания аутоантител и бунгаротоксина. Соответственно, мы отверг­ли гипотезу о наличии аутоантител к а9-ХР в сыворотке больных пузырчаткой.

Для выделения антител, специфичных к NhIgG, IgG, антитела из сыворотки больных ВП пропускали че­рез аффинную колонку. Связалось 2, 7 % общего белка. Полученные «элюат» (специфичные к NhIgG антите­ла) и «проток» (антитела, не связавшиеся с NhIgG) анализировали на клетках линии HaCaT, экспрессирующие ДСГ3. Показали, что в «элюате» есть антитела, связывающиеся с ДСГ3, что было подтверждено с использова­нием моноклональных антител к ДСГ3. Полученные данные свидетельствуют о существовании биспецифич­ных IgG антител в сыворотке больных вульгарной пузырчаткой. Для оценки роли этих аутоантител в патогене­зе пузырчатки требуются дальнейшие исследования.